이매스교육 및 공지사항
본 논문은 mAb 의 생산에 있어 발현 공정 시 환경적인 pH 에 따라 Glutamate(E) 가 pyroglutamate(pE)로 bioconversion 이 될 수 있음을 in vitro 실험을 통해 약산의 pH 범위인 pH’ 5.5–6 에서 일어날 수 있음을 입증한 논문입니다.
본 문헌 내용의 중요성은 pyroglutmate 의 형성 여부에 따라 항체 단백질의 heavy chain
의 variable region 의 1차 구조적
변화에 따른 biological activity 에도 직접적인 영향을 줄 수 있다는 점과 단백질의 1차 구조 분석 항목에 해당하는 N-term sequencing 분석법에는 Edman degradation method 와 LC-MS 를 이용하여 peptide mapping 분석 접근을 통해 서열 확인이 이루어 지는데 이때,
Edman degradation 접근 시 pyroglutamate 가 위치한 N-term 의 구조인 경우 반응 시그널이 불검출됨에 따라 N-term
sequencing 결과를 획득하지 못할 수도 있다. 이때에는 해결 방법으로 제시할 수
있는 방법이 deblocking 방법의 한가지인 pyroglutmate
aminopeptidase 를 반응하여 1st residue 에 위치한
pyroglutmate 를 제거 후 edman sequencing 분석을
진행하거나 formulation 된 상태 그대로 진행을 희망하는 경우 peptide mapping 분석을 통해 N-term sequencing 분석을
진행해도 된다. 단, pyroglutmate 의 비율을 확인하고자
한다면 전자의 방법인 pyroglutamate aminopeptidase 를 처리한 후 1st initial A.A 의 peak 면적비율을
통해 pyroglutamate 함량비율을 평가는 방법도 제안한다.
참고로 in vivo 의 cell line 내 mAb 중에서는 특히, human 의 경우 IgG2 계열의 항체에서 주로 일어날 수 있는 것으로 보고되고 있다.
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