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    [HPLC] Ion Pairing Chromatography 수행할 때 PIC reagent에 대하여
  • 작성자

    이매스
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◆ PIC 시약 
: 이온성 시료를 Reverse phase에서 분리하기 위해 시료에 반대 전하를 붙여 비극성화 시키는데 사용되는 변형체(modifier)

PIC 시약은 유기 역이온으로써 종래 이온성 시료에서 발생하는 분석상의 문제(Peak tailing이나 긴 분석시간)를 해결하기 위해 개발되었다.
이전의 이온 교환방법 대신 PIC 시약을 이용하면

① 정확한 pH를 조절할 필요가 없으며 재현성이 뛰어나고 컬럼의 수명도 연장된다.
② 또한 산성, 염기성, 중성 화합물을 동시에 분리할 수 있다.
③ 이외에도 저파장용 PIC 시약은 저파장에서 사용할 때 background interference가 생기지 않는다.
 
 
  특징

254 nm 혹은 그 이상의 파장에서 발색단을 가지고 있지 않은 pairable 화합물에 대해서도 PIC 방법을 이 용하여 분리할 수 있으며 기존의 PIC 시약을 사용할 경우 UV response가 제한되는 화합물도 효과적으로 분리할 수 있다. 역상 크로마토그래피의 경우, 이온성이 강한 시료는 비극성 고정상에는 머무르기 어렵고 컬럼의 Vo(non-retention volume) 부근에서 용출된다. PIC는 Paired Ion Chromatography의 첫머리로 이온성이 강한 시료의 분리, 분석을 목적으로 개발된 역상분배 크로마토그래피의 응용방법이다.
 
 

  원리
 
이온성 물질의 분리, 분석에서 수용액 중에 나타나는 시료의 이온 전하에 상반하는 유기성 강전해질 대립이온을 첨가하여 ion pair extraction 현상에 의한 것으로 ion complex 형성의 결과 지용성화 되어 시료의 머무름 시간이 증가된다.
 
 

  농도
 
일반적으로 1L 이동상에 PIC 시약 1병을 첨가하여 사용하며 이때 농도는 0.005M이 된다.
 
 

  pH
 
PIC-A 시약은 7.5, PIC-B 시약은 3.5로 조절되어 있다.
실험시 시료가 산성이온(-charge)이라면 이동상에 대립이온으로 염기성 이온인 PIC-A 시약을 사용하고 시료가 염기성(+charge)이라면 첨가하는 대립이온은 산성이온인 PIC-B5 시약을 사용한다. FD&C Sulfonic acid 염색제들(산성시료)은 이온교환방식으로 분리되는 화합물의 전형적인 예인데 PIC 시약과 역상 방식을 이용하면 Sulfonic acid 염색제와 같이 미량으로 존재하는 불순물들을 보다 쉽고 빠르게 분리할 수 있
다. 일반적으로 이온교환 크로마토그래피로 분리되는 화합물 중에서 4차 amine은 PIC B 계열의 시약 중에서 하나를 이용하면 PIC 방식으로 쉽게 분리될 수 있다. PIC D-4 시약은 물이나 물과 유기용매와의 혼합액에 첨가되면 competing base 효과에 의해 여러 종류의 amine을 분리하기에 적합하다.
 
 
 
PIC 시약의 종류
 
 
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PIC 시약으로 분석 할 수 있는 물질
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