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이매스교육 및 공지사항

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  • 제목

    [HPLC] 사용하는 이동상의 탈기 목적 및 탈기 방법

  • 작성자

    이매스

  • 첨부파일

 
HPLC 사용시에는 불순물 뿐만 아니라 기포의 제거가 상당히 중요한 부분이다.
 

◈ 사용용매나 시료의 불순물로 인하여
① 용매에 담궈 사용하는 solvent reservoir filter가 막혀서 이동상이 펌프로 흘러가지 못할 수 있으며
② pump head내의 seal을 마모시켜서 펌프에서 용매가 새는 원인이 될 수 있고
③ check valve, filter, tubing, column 등이 막혀 시스템 압력이 높아지고 용매가 제대로 흐르지 못할 수도 있다.
 

◈ 기포의 유입
→ 압력 변화를 초래해 바탕선의 흔들림, 높은 압력으로 인한 시스템 수명 단축, 컬럼의 손상 등을 가져 올 수 있다.
◈ 탈기를 하는 방법

① 진공펌프를 이용해 용액을 거르며 입자 제거 및 탈기를 동시에 하는 filtration

- Filtration을 할 경우에는 solvent clarification kit를 사용하며 이 kit의 reservoir(funnel)와 funnel base 사이에 disk type의 membrane filter를 사용하는데 유기 용매와 수용액을 구분하여 사용하여야 한다.
유기용매가 20% 미만인 이동상, 물 100%인 이동상에는 수용성 필터를 사용하여야 한다.
수용성 필터는 PVDF(poly vinylidene fluoride) 재질로 되어 있으며 0.45㎛ pore size를 갖는 47mm ID filter를 사용하면 되고 사용 전에 100% 물을 먼저 여과하여 활성화시킨 후 사용하면 된다.
유기용매가 20% 이상인 경우에는 PTFE(poly tetrafluoro ethylene) 재질로 된 pore size 0.45㎛ (Maker에 따라서 0.5㎛), ID 47mm filter를 사용하면 되고 먼저 100% 유기용매를 통과시켜 활성화시킨 후 세척을 위해 실제 사용할 이동상으로 여과하여 kit와 membrane을 세척 후 사용하면 된다.
만일 유기용매를 수용성 filter를 이용해서 filtration 하는 경우에는 membrane이 녹아서 filtration apparatus의 funnel base의 구멍을 막아 사용할 수 없게 되므로 주의하여야 한다.
Ion chromatography에 사용할 buffer는 pore size 0.22㎛의 이온 전용 필터를 이용하여 여과하여야 한다.
② 초음파를 이용하여 기포를 제거하는 Ultrasonication
③ On-line 방식으로 실험 진행동안 계속해서 용매에 용해도가 작은 He gas를 불어넣어 기포를 제거하는 방법이 있다.
 
 
 
 
 
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