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• 제목

  [LC/MS] Standard 를 이용한 검출 감도 test

• 작성자

  이매스

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HPLC 단일 system 의 경우 일반적으로 UVD/VWD와 또는 DAD 와 같은 optical detector 가 주로 검출기(detector)로 사용하게 되며 LC-MS system 의 경우에는 detector 역할이 일반적으로 mass spectrometer 가 그 역할을 담당하게 됩니다. 따라서, 각각의 system 의 set-up 에 따라 검출기에 대한 감도 측정을 위해 표준물질(standard)를 이용하여 측정 후 데이터 분석을 통하여 시스템 적합성(system suitability)을 판단하게 됩니다.

 

본 자료는 가장 일반적으로 사용되는 검출기의 감도 테스트를 공개 자료를 통하여 소개하고자 합니다.

 

1. HPLC 단일 system 에서의 테스트 과정과 이론

- 준비물 5개의 서로 다른 농도의 caffeine standard(in water) : 참고로 UV detector model 에 따라 테스트 농도가 다르므로 별도로 언급하지는 않음. (각 제조사별 표준 시험법을 참고)

 

- 검증 원리 : 예를 들어 UV detector 인 경우 표준물질의 peak area 를 농도 대비 환산하게 되면 테스트 농도 범위 안에서는 직선성(linearity)가 입증되는 것이 검출기의 linearity 가 하드웨어적으로 입증되었다고 말할 수 있습니다. (아래 검량선을 참조)

 

black : 검출감도는 높으나 직선성(linearity)가 나쁜경우 blue : 검출감도는 상대적으로 낮으나 직선성이 좋은 경우

(black line 의 경우 하드웨어적인 보정과정 또는 수리를 거쳐 재검증과정을 수행하여 blue line 의 결과가 나올때 까지 반복 수행한다. )

 

 

- 검증 과정 :

1. HPLC condition

1) Flow rate : detector model 에 따라 가변적 (0.2 ~ 1.0ml/min)

2) Solvent : only water (만약, 다른 용매와 섞어 사용할 경우 baseline 에 간섭영향이 있다.)

3) Flow injection analysis : column 을 사용하지 않는다. (column 상태에 따른 effluence 에 영향을 받을 수 있다.) 이외에 모든 test 에서는 column 을 연결을 제외함을 참고

4) Injection volume : 각각 다른 농도의 표준물질이 injection 되도 동일 부피를 주입하는 것이 원칙

5) Wavelength : 272(3) nm

 

2. 1항에 준하는 method 를 준비

3. 5개의 농도별 데이터를 acquisition 한다.

4. peak integration 을 통한 면적 값을 구한다.

5. 검량곡선을 X : 농도, Y : 피크면적 구한다음 regression factor (R) 값을 구하고 기준이상 값을 나타내는 경우 본 detector 는 검출감도에서는 농도 비례적인 유효한 측정이 가능하다고 판정이 된다.

 

2. LC-MS system 에서의 테스트 과정과 이론

- 준비물 4~5개의 서로 다른 농도의 triazine standard mix (in methanol) : 참고로 MS detector model 에 따라 테스트 농도가 다르므로 별도로 언급하지는 않음. (각 제조사별 표준 시험법을 참고)

- 검증 원리 : UV detector 와 동일하게 표준물질의 peak area 를 농도 대비 환산하게 되면 테스트 농도 범위 안에서는 직선성(linearity)가 입증되는 것이 검출기의 linearity 가 하드웨어적으로 입증되었다고 말할 수 있습니다.

 

- 검증 과정 :

1. LC condition

1) Flow rate : detector model 에 따라 가변적 (0.2 ~ 1.0ml/min)

2) Solvent : 50% MeOH:Water ( UV detector 와는 다른 설정)

3) Flow injection analysis : column 을 사용하지 않는다. (column 상태에 따른 effluence 에 영향을 받을 수 있다.) 이외에 모든 test 에서는 column 을 연결을 제외함을 참고

4) Injection volume : 각각 다른 농도의 표준물질이 injection 되도 동일 부피를 주입하는 것이 원칙

5) 제조사가 제시하는 표준 MRM method 를 준비 (이 방법을 통한 테스트 전 MS 단독의 IQ/OQ 가 수행되어 있어야 함.)

 

2. 1항에 준하는 method 를 준비

3. 4~5개의 농도별 데이터를 acquisition 한다.

4. 표준물질 중 가능 이온화 효율이 좋은 물질에 대한 peak integration 을 통한 면적 값을 구한다.

5. 검량곡선 (X : 농도, Y : 피크면적)의 각 측정데이터를 구한다음 regression factor (R) 값을 구하고 기준이상 값을 나타내는 경우 본 detector 는 검출감도에서는 농도 비례적인 유효한 측정이 가능하다고 판정이 된다.

참고로 optical detector 와 달리 Y axis 의 기준은 이온화 효율을 양적인 수치로 나타내는 count per sec (cps) 단위로 산정한다.