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  [LC/MS] 액체질량분석 장비 사용시 내가 분석하는 물질에 대한 최적의 분석을 위한 tip

• 작성자

  이매스

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1. 시료 주입 :

1) 비휘발성 용매 (ex. phodphate buffer,detergent ) 사용 금지

2) 양이온의 검출 조건 분석 시 가급적 pH 가 산성이 되게 조건을 맞춘다.(음이온 조건은 중성 pH 또는 약알카리)

    (TFA 와 같은 강산은 양이온 조건에도 불리하고 특히, 음이온 조건에서는 사용금지)

3) 시료 내 또는 용매 내 salt 는 없는 조건 또는 최소화 한다.

    (정상적인 신호 기준인 1가 양이온 ([M+H]+) 또는 1가 음이온 ([M-H]-) 을 검출하기 위한 주변을 최적화)

 

2. 이온화 장치 :

1) 분석하고자 하는 대상의 polarity 이온을 적절하게 만들기 위해 분사(neubulization)시 가하는 전기에너지를 적절하게 조절하여

signal to noise ratio 의 조건을 최적화 한다.

2) 시료를 주입하는 유속에 적절하게 열을 가하거나 때로는 열을 가하지 않는다. (특히, HPLC 를 이용시에는 heater 작동이 필수)

3) 분사 시 혼합되는 N2 gas 량은 이온화 정도에 직접적인 영향을 미친다. (유속에 따라 적절하게 조절한다.)

4) 물(극성)과 Methanol(Acetonitrile) 과 같은 비극성 용매를 적절하게 혼합하여 시료의 용매 조건으로 사용한다.

   (전자 전달 효율성과 휘발성 모두를 충족해야 이온화 조건을 최적화 할수 있다.)

5) 분석 물질자체의 열안정성 보다 분석물질이 포함된 시료의 열 안정성을 잘 확인하고 가열 방식을 선택한다.

  (시료 자체가 열에 안정한 상태 : heated neubulizer 를 사용하여 직접 가열 가능, 단, 혈액 등과 같이 생체분자가 포함된 시료는 가급적 간접 기화 방식을 선택한다.)

 

3. 이온분리 장치 (C+D+E+F)

1) 이온에 대한 선택적인 속도를 전기적인 힘을 통해 각 구간별 조절이 가능하나, 가장 초기에 속도를 만드는 에너지가 이온의 최적 감도를 결정하는 중요 에너지 이다. (AB SCIEX 장비의 경우 : DP 값에 해당)

2) MS 조건으로 분석의 경우 Q1 만들 사용하여 이온을 분리하므로 precursor ion 에 대한 선택적인 이온의 속도 에너지를 최적화해야 한다.

3) MS/MS 조건으로 분석할 경우 앞서 MS 조건의 속도에너지 뿐만아니라 Q2, Q3 위치에서의 속도에너지 조절을 통해 MS/MS transition 된 target ion 에 대한 감도가 가장 좋은 속도에너지 조건하에서 분석이 진행되어야 한다.

 

* 가장 중요한 노하우는 분석 조건에서의 극성에 따른 pH, 휘발성, 이온화를 위한 전기적 힘과 마지막으로 이온을 선택적으로 분리해내기 위한 속도 조절에 필요한 전기적 힘을 적절하게 잘 조절하는 부분을  고려하게 되면 분석하는 입장에서의 기대하는 최적의 결과를 얻을 수 있다.