이매스교육 및 공지사항
Edman sequencing 분석에 적합한 PVDF membrane 제품군과 구별 방법에 대한 가이드를 드리고자 합니다.
1. 요지
Edman sequencing (edman degradation method)
분석법은 반응 특성 상 반응 중 단백질의 고정화를 위한 membrane 이 필요하며 이때는
dot-blot 방법이나 electro-blot 방법을 이용하여
적절한 양의 단백질을 고정화를 시킨 membrane 을 시퀀서 장비에 주입하여 분석을 진행해야 합니다. 최근 다양한 분석하는 목적에 따라 각 목적에 맞게 효율성을 증대 시킨 PVDF
membrane 제품군이 출시되고 있는 추세를 감안할 때, sequencing analysis 목적과
immune-blot analysis 목적으로 구별하여 PVDF 제품을
선택적으로 사용해야하는 흐름에 분석 고객분들에게 가이드를 드리고자 PVDF membrane 에 대한
선택 가이드를 정리하여 공지합니다.
2. Protein sequencing 이 가능한 PVDF 제품군 (추천군)
2.1. Sequi-Blot™ PVDF Membrane / Biorad
2.2. Hybond SEQ / amersham biosciences
2.3. Immobilon-PSQ Membrane / Merck Millipore
3. 그 외 PVDF 제품군
중 protein sequencing 이 가능한 PVDF membrane
확인 방법
Protein sequencing에 적합한 PVDF membrane의 경우 blotting을 수행하기 전 100% MeOH에 1분이내의 시간으로 soaking (activation)을 시키는 전
처리 과정에 해당하는 PVDF membrane의 경우가 protein
sequencing에 적합한 membrane입니다.
Membrane 의 pore
size 는 분석하고자 하는 단백질의 극단적인 분자량 범위 (>100kDa, <5kDa)이상의
단백질을 제외하고는 0.45, 0.2um 에 대한 필수적인 선택 사항에 해당합니다.
4. Dry blot 방식의 전용 PVDF
membrane 은 사용을 피할 것
Dry-blot 전용 소모품에 함께 구매하는 PVDF 인 경우 nitrocellulose 가 혼입된 재질을 사용하는
특성상 sequencer 반응에 사용되는 시약 및 용매에 높은 화학적 반응성을 나타냅니다. 따라서 dry-blot kit의 PVDF
membrane 은 앞서 언급한 제품군의 PVDF를 100%
MeOH에 soaking 이후 동일한 과정으로 사용하시면 되겠습니다.