Protein Sequencing 결과가 잘 나오지 않는 경우 우선적 고려사항
• 순도 : 여러 아미노산의 검출되고 repetitive yield 현저히 감소
• 양 : 20 pmol 이상 (50 pmol 이상 권장)
(cLC sequencer의 경우 : 20 pmol 이상으로 10 pmol 이상 권장)
• 간섭물질 (interfering substances) :
- primary or secondary amins
(tris, glycine, ampholines, guanidine, ammonium sulfate, other ammonium salts etc)
• 양 : 20 pmol 이상 (50 pmol 이상 권장)
(cLC sequencer의 경우 : 20 pmol 이상으로 10 pmol 이상 권장)
• 간섭물질 (interfering substances) :
- primary or secondary amins
(tris, glycine, ampholines, guanidine, ammonium sulfate, other ammonium salts etc)
- triton X-100, SDS, Tween, aromatic compounds
- high salts (sulfate, phosphate)
* PVDF membrane에 blotting할 경우 대개의 간섭물질은
50% MeOH에 membrane을 washing함으로써 제거 가능
50% MeOH에 membrane을 washing함으로써 제거 가능
• N-terminal blocking 여부 확인 ; deblocking methods를 사용하던지
internal sequencing analysis를 한다. 단, 시간과 비용이 소요되는 단점이있다.
internal sequencing analysis를 한다. 단, 시간과 비용이 소요되는 단점이있다.
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