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[HPLC] HPLC - 화학 결합상 크로마토그래피

 
화학 결합상의 장점
 
실리카의 표면은 OH 작용기(실란올 작용기)를 가지고 있으므로 이 작용기에 화학 결합을 시켜서 분석물의 특성적인 분리를 주는 화학 결합상(chemical bonded phase)이 만들어 진다. 모든 화합 결합상 중에서 가장 널리 사용되는 정지상은 octadecylsilane (ODS) 또는 C18 정지상이다. 이는 가장 비극성으로서 역상이나 이온쌍 크로마토그래피에서 우선적으로 사용되고 있다. 다음으로 많이 사용되고 있는 큰 극성과 중간 극성 정지상으로서 amino, cyano와 diol 화합 결합상이 있다. 역상이나 정상으로 사용되고 있는 cyano 또는 oxypropionitrile 정지상의 배열은 꼬리(tail) 또는 솔(brush) 모양을 가지고 있다. 이러한 정지상을 단위체(monomeric)형이라고 한다.
cyano 결합상으로부터의 분리는 실리카의 분리 결과와 비슷하지만 선택성은 종류별로 다르다. 실리카에 비해 이들 정지상의 장단점들이 있는 첫째로 정상이나 역상 분리 기법에 사용할 수 있고, 둘째로 정지상을 활성 감소(deactivatiom) 시킬 필요가 없고(물에 의한 실리카의 활성 문제), 셋째로 이동상 용매의 종류를 바꿀 경우에 이동상과 정지상 사이에 평형 시간이 짧고, 넷째로 용미 기울기가 가능하다.
 
 
몇가지 화학 결합상의 특징
 
1) Diol 화학 결합상 : 이 정지상에 있는 OH 작용기는 실리카의 OH 작용기와 같아서 수소 결합을 형성 할 수 있는 분석물에 중요하지 때문에 tetracycline류 항생제, steroid류, 유기산류와 단백질을 포함한 생체 고분자 분석에 적합하다.
 
2) Nitrile 화학 결합상 : Nitrile 정지상의 극성은 낮으며 실리카의 분리와 비슷한 결과를 나타내지만 같은 이동상에서 분석눌의 머무름 인자값은 더 작다. 선택성은 이중 결합 분석물과 tricyclic 우울증 치료제의 분석에서 특이하다.
 
3) Amino 화학 결합상 : NH2- 작용기는 쉽게 산화되므로 peroxide(ethyl ether, tetrahydrofuran, dioxane 중 함유)가 조금도 없는 용매를 사용해야 한다. 또란 이는 ketone류와 aldehyde류와 반응해서 Schiff 염기(-N=CRR')를 만든다. 다른 화학 결합상에 비교하여  amino 실리카는 가수분해가 쉽게 일어나므로 전치 컬럼(pre-column)을 사용해야한다. 아미노 컬럼은 오래 전부터 설참과 glycoside 분석에 사용하였다. 유기와 무지 음이온들(acetate, acrylate, glycolate, formate, nitrite, bromide, nitrate)은 인산 완충 용액을 사용하여 아미노 컬럼에서 분리 할 수 있다.
 
 
 
 
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