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[HPLC] 이온쌍 크로마토그래피 방법 및 지침

 
 
이온쌍 크로마토그래피 (ion pairing chromatography)
 
수용액에서 해리하는 분리 물질에 대한 방법. 분리되는 산 HA염기 BOH고정상이나 이동상에서 적합한 반대 이온 G 또는 G로 존재한다. 이것은 염을 형성한다.
 
이온쌍 AGBG분포 계수는 유리 산이나 유리 염기의 분포 계수와 다르기 때문에 혼합물 속에 nonionogenic 성분은 영향을 받지 않는 반면, ionogenic 화합물의 보전 양상은 유의적으로 변한다. 이온쌍의 형성은 산과 염기 성분, 그리고 반대 이온과 이온쌍을 생성하는 화합물의 해리 평형으로 결정된다. 고정상이나 이동상의 pH에서의 변화는 이온쌍 해리에 영향을 줄 수 있다. 그러므로 체계는 흥미있는 물질의 분리에 선택적으로 최적화된다. 최적 분리를 위한 pH 조절을 위해 반대 이온을 생성하는 화합물은 넓은 pH 범위, 예를 들어 강한 산(과염소산 또는 알킬술폰산)이나 강한 염기의 염(4차 암모늄염)에서 해리되어야 한다. 버퍼 용액은 2와 8 사이에서 선택된 값으로 pH 상수를 유지하는 데 사용된다.
[네이버 지식백과] 이온쌍 크로마토그래피 [-雙-, ion-pair chromatography] (화학대사전, 2001.5.20, 세화)
 
이온쌍 크로마토그래피 방법 및 지침
1. 역상(이동상의 pH조정이 없음)이나 이온 억제 방식에서 머무름 인지가 최적 범위 또는 피크 모양이 만족스럽지 못하거나 이온성 비이온성 분석물들을 동시 분리 할 경우에 이온쌍 방식을 사용한다.
2. 반대 이온의 올바른 선택은 머무름 인자와 분리 인자에 영향을 주므로 부석물의 친수성 또는 소수성 문제에 따라 정반대의 반대 이온 화합물과의 이온쌍을 만들어 주어야 역상 기법에서 분리가 잘 이루어진다. 버퍼의 농도는 50~200mM 범위에서 사용한다. 또한 반대 이온의 이동상에 대한 용해도와 uv 차단 파장을 충분히 고려해야한다.
3. 이동상의 pH는 분석물의 이온화가 최대가 되는 pH이어야 하고(pKa±2), 이를 위한 완충제를 선택해야 하고, 미리 탈기한 이동상에 반대 이온 화합물을 녹여야한다.
4. 정지상으로 C18 또는 C8은 단위체 형(monomeric)의 종류를 사용해야 한다. 분석이 끝나면 이동상은 컬럼과 장치 내에 남아있지 않도록 물이나 유기용매로 씻어준다.
5. 분리가 잘 되지 않으면 gradient를 시도하고, 반대 이온이나 완충 용액의 농도들을 최적화 시킨다. 이온성 화합물과 비이온성 분석물이 함께 함유된 시료를 분석할 경우에는 비이온성 분석물을 먼저 최적화하고, 이온성 분석물에 대한 적당한 반대 이온 화합물을 찾아본다.
 
 
 
 
 
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