1. 정성분석

1) 머무름 시간 (Retension time)에 의한 방법
머무름 시간은 주어진 실험조건에서 이동상과 고정상에 따른 특성이므로 화학물질을 확인하는데 이용할 수 있다. 즉 동일한 HPLC 조건에서 미지의 물질과 표준물질의 머무름 시간을 비교하는 방법이다. 또 다른 방법으로는 상대적인 머무름 시간에 의한 방법이다. 이것은 분석하고자하는 성분과 표준 물질의 머무름 시간의 비를 이용하는 방법으로 보다 정확한 값을 가지고 있다. 또 다른 방법은 두가지 이상의 컬럼에 대한 머무름시간을 표준물질과 함께 비교하는 방법이다.

 

2) 검출기의 감응에 의한 확인법
일정한 조건에서 두 개 이상의 서로 다른 검출기를 사용하여 화학물질의 특성을 비교하는 방법이다. 시료를 한컬럼에서 용출시켜 첫 번째 검출기를 통과시키고 난 후에 제2의 검출기에서 다시 확인하는 방법이다. 그러나 다이오드어레이(Diode-array detector)를 사용하는 경우에는 시료성분에 대한 각 피크에 대한 특이한 가시광선-자외선 흡수스펙트럼을 확인할 수 있기 때문에 제2의 검출기를 사용하지 않고도 확인이 가능하다. 분석하고자하는 물질이 특이적인 자외선흡수를 하지 않는 경우는 유도체를 만들어 확인할 수도 있다.

 

 

2. 정량분석

1) 내부표준법
이 방법은 상대적 또는 간접적인 방법으로 시료와 표준물질과의 농도비를 적절히 여러 개로 만들어 분석하고 피크넓이의 비와 농도비를 이용하여 검량선을 만든 다음 내부표준물질을 일정량 정확하게 미지시료에 넣은 후 추출 분석을 한다. 넓이의 비를 측정하고 검량선 위에서 미지시료와 표준물질의 농도비를 구한다. 일정량의 내부표준물질을 첨가하였으므로 미지물질의 양을 쉽게 계산할 수 있다. 이 방법의 장점은 주입된 량을 정확히 측정할 필요가 없고 검출기의 반응이 변하더라도 넓이의 비에는 영향을 미치지 않는다는 것이다. 이때 사용 하는 내부표준물질은 시료의 어떤 성분과도 잘분리되는 것이어야 하며 시료 성분에 포함되어 있지 않아야 되며 순수한 물질이어야 한다.

 

2) 외부표준법
순수한 표준품 시액을 정확한 양 주입한 후 얻은 피크의 넓이를 농도에 따라 표시하여 검량선을 만들고 미지시료를 정확한 양 주입하여 피크넓이를 측정한 후 검량선으로부터 시료성분의 양을 계산하는 방법이다. 이 방법은 주입된 시료의 양을 정확히 알아야 하고 검출기의 감도가 분석 할 때마다 다르기 때문에 항상 새로운 검량 곡선을 만들 필요가 있다.

 

3) 표준물질 첨가법
이 방법은 외부표준법과 내부표준법의 복합이다. 최적조건에 시료를 분석 하고 난 후 시료에 일정량의 정량할 표준물질을 넣어 준 후 다시 분석한다. 이들 피크의 면적으로부터 성분의 농도를 구할 수 있다.