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    [HPLC] HPLC columns 선택 기준

  • 작성자

    이매스

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HPLC system의 핵심은 HPLC column에 있습니다.
컬럼을 이해하기 위한 8가지 기본적인 사항은 다음과 같습니다.
 
1. Column Dimensions
컬럼은 4.6x250mm가 보통 표준입니다.
길이 및 내경을 바꿀 경우의 특징은 다음과 같습니다.
• Short (30-50mm) – short run times, low backpressure
• Long (250-300mm) – higher resolution, long run times
• Narrow (≤ 2.1mm) – higher detector sensitivity
• Wide (10-22mm) – high sample loading
 
2. Particle Shape
구형의 입자가 back pressure가 적게 걸리고 컬럼수명이 깁니다.
 
3. Particle Size
보통 3-20μm의 입자로 구성되며, 분석용 컬럼의 대부분은 5um입니다.
입자가 작아질수록 유속에 따른 이론단의 높이변화가 적어 컬럼효율이 좋아집니다.
 
4. Surface Area
입자의 바깥과 pore의 표면을 모두 합친 면적으로, 표면적이 클수록 분리능이 좋아지고 retention이 커지는 반면, gradient 분석시 평형시간이 길어질 수 있습니다.
M2/g의 단위로 나타냅니다.
 
5. Pore Size
보통 60-10,000Å까지 있으면, 분석용 컬럼의 대부분은 150Å이하입니다.
분자량이 큰 물질을 분석할 경우 pore size는 커야 됩니다. 단백질과 같은 고분자를 분석할 경
우 300Å의 컬럼을 많이 사용합니다.
 
6. Carbon Load
Reverse phase 컬럼의 경우 함유된 carbon의 함량을 %로 나타냅니다. Carbon load가 커질수록
분리능이 좋아집니다. PerkinElmer에서는 27%의 높은 carbon load를 가진 C18 컬럼을 제공하고
있습니다.
 
7. Endcapping
C18컬럼의 경우 반응하지 않은 silanol group이 표면에 남아있게 되는 데 이는 secondary
interaction의 원인이 됩니다. 이를 방지하기 위해 화학적으로 처리가 되었을 경우 endcapped되
었다고 합니다.
 
8. pH range
HPLC column은 모두 사용 가능한 pH range가 정해져 있습니다. 분석하시고자 하는 방법의 이동상
의 pH를 컬럼이 견딜 수 있는 지 반드시 확인해 보아야 합니다.
컬럼을 교체하시거나 새로 구입하시고자 할 때 위와 같은 내용을 확인해 보시면 선택의 기준에 도움이
되실 것입니다.
 
 
 
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