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Protein ID 분석 시료 준비 추가 : Silver stained gel

분석 고객 분들에게 보다 넓은 선택의 폭을 제공하기 위하여
금일 이후 부터 silver stained gel protein 시료에 대한 분석도 접수를 받고 있습니다.
 
이에 따라 Mass spectrometry 분석을 위한 silver stained gel 시료 준비 과정에서 몇 가지 주의사항을
공유하고자 합니다.
 
1. Silver stained kit 구매 / 사용 시
Mass spectrometer 분석이 가능한 등급의 시약으로 구성된 제품을 사용해 주시기 바랍니다.
 
2. Development 시간 조절
일반적으로 stained strength 를 높이기 위하여 development time 을 늘리는 경우가 있으나
이는 developer reagent 로 인한 in-gel protein 을 fix 시키는 결과를 초래합니다.
따라서 Mass spectrometer 분석을 위한 시료 준비 시에는 2분 이내의 development time
준수하여 준비해 주실 것을 권장합니다.
 
3. 사용 전 PAGE-gel 첨가제 및 시료 준비 방법 확인
분리능 항샹을 목적으로 PAGE gel 제조 시 다양한 첨가제들 및 조성을 달리하여 단백질 간
분리능을 향상 시키는 precasting gel 을 구매해서 사용하시거나 homemade gel 를 제고해서
사용하실 때 protease inhibitor 로 작용하는 tricine 성분이 들어간 gel 의 사용을 피하셔야 합니다.
Gradient gel (acrylamide) 사용 시에는 gel 내에 농도 구배가 발생하므로 본인의 target protein
위치와 농도의 상관성을 확인 후 8~15% 범위를 벗어나 위치에 있는 단백질은 가수분해 효율성이
발생할 수 있습니다. 따라서 이런 경우에는 Nitrocellulose membrane 이나 PVDF membrane 을
이용한 blotting 후 membrane 상 transfer 된 단백질 시료로 제공하시면 훨씬 좋은 결과를 얻을
수 있습니다. 이 방법은 membrane protein 에도 응용할 수 있는 방법입니다.
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