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[BT] Protein Sequencing 에 최적의 PVDF membrane 을 위한 가이드

A. protein sequencing 에 최적화된 제품군
 
BioRad : Sequi-Blot PVDF membrane 제품군
Milipore : Immobilon-Psq Transfer Membrane 제품군
Milipore : Immobilon-P Transfer Membrane 제품군
Invitrogen : Invitrolon™ PVDF 제품군
Pall Co. : BioTrace™ PVDF Transfer Membrane
Amersham : Hybond PVDF Membranes
 
* 본 제품군은 Edman Sequencing 의 분석과정에 적합하게 formulation 된 특성이 있으며 일반적 화학적 물리적 내성이 강한 특징이 있다. 참고로 일반 blotting PVDF membrane 의 경우에도 분석 시료 준비해도 분석이 가능하다.
 
B. memrbrane pore size 와 단백질 분자량과의 상관관계
 > 20kDa 인 경우 0.45um < 20kDa 의 분자량이 target protein 인 경우 0.2um
그리고 5kDa 미만의 경우 0.1um pore size 를 사용하는 것을 권장한다.
 
C. Membrane 유형별 특성
 
Nitrocellulose membrane 보다 PVDF membrane 을 사용해야 하는 이유 중 가장 큰 이유는
물리, 화학적 안정성이 가장 크다. 특히 NC membrane 의 경우 ethyl acetate, MeOH, 1-chlorobutane
등과 같은 용매에 쉽게 용해되는 성질이 있다. 따라서 protein support 로서는 적당하지 않다.

따라서 현재 시판중인 PVDF membrane 이나 nitrocellulose 재질이 혼합되어 있는 제품은 피하시길 바랍니다. 
(iBlot 7minute transfer kit 내 함께 소모품으로 사용하는 PVDF 제품군)
 
그 다음 protein transfer 효율인데,
western blotting 인 경우 항체의 검출 감도와 형광 물질에 대한 안정성으로
NC membrane 을 사용을 더 권장한다. (반면, 단백질의 결합력이 PVDF membrane 에 비하여
상대적으로 약하므로 strip 을 하는 경우에 transfer protein 이 쉽게 wash-out 되어 버린다.)
 
반면, protein transfer 효율이 높은 PVDF membrane 의 경우 반복적인 strip 에도 transfer protein
이 안정하게 고정이 되어 있다.
 
또한, membrane 의 사용 시 NC membrane 의 경우 activation 의 별도의 과정이 필요 없이
바로 사용이 가능하나, PVDF membrane 의 경우 MeOH 에서 1분 정도의 activation 절차 이후
사용해야 membrane 으로 단백질이 정상적인 transfer 가 가능하다
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