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HPLC-FLD를 이용한 당 분석 시 반드시 수행해야 할 2-AA/2-AB labeling 및 labeled N-glycan 정제 방법

HPLC 분석법의 도입을 위하여 별도의 2-AA/2-AB labeling을 위한 전처리 과정이 필요합니다.

다음은 당단백질에서의 glycan 분리/정제 후 별도의 2-AA/2-AB labeling을 위한 전처리 과정입니다.


1. 만들어 놓은 labeling solution 5㎕를 건조된 당사슬에 넣어 섞어준다.

2. 37℃에서 16시간 반응시킨다. 반응시간 동안 때때로 섞어 주어 labeling 효율을 높인다.

3. 상온에서 식힌 후 정제과정을 수행한다.

4. 25% ACN 1㎖을 cyano SPE column에 넣고 주사기를 이용해 천천히 흘려준다.

5. 96% ACN 0.5㎖을 column에 넣고 흘려주기를 2회 반복한다.

6. 형광 표지된 당사슬을 column에 넣고 천천히 흘려준다.

7. 96% ACN 0.5㎖을 column에 넣고 흘려주어 씻어주기를 2회 반복한다.

8. 60% ACN 0.35㎖을 column에 흘려주어 labeling된 당사슬을 elution 한다.

9. Elution 과정을 한 번 더 반복한다.

10. 회수된 당사슬은 SpeedVac을 이용하여 건조한다.

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